慢病毒载体 pLV-EF1a-EGFP-2A
更新时间:2015-07-08 17:14:37
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详细介绍
载体特性
类型:慢病毒基因过表达载体
基因启动子:EF1a promoter
荧光标签:EGFP
真核细胞筛选抗性:Puromycin
原核抗性:Ampicillin
pLV-EF1a-EGFP-2A载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体。该载体的多克隆位点位于EGFP基因下游,在CMV启动子驱动下表达目的基因和EGFP 的mRNA,翻译为蛋白后,蛋白中的2A序列将目的蛋白和EGFP蛋白切开,从而实现两个蛋白在同一启动子下表达,单独发挥作用。EF1a启动子来自人类靶向延长因子 1α(EF1A)基因,可在多数种类细胞中稳定表达,尤其是某些CMV启动子会发生沉默的细胞如干细胞等。pLV-EF1a-EGFP-2A载体通过将EGFP与目的蛋白的分开表达,有效避免EGFP标签对目的蛋白功能的影响。
使用说明
pLV-EF1a-EGFP-2A载体用于在包括原代培养细胞在内的各种哺乳动物细胞中稳定表达外源基因和Puromycin抗性基因。pLV-EF1a-EGFP-2A载体与包装载体共转染293V细胞后(包装体系货号KLV3501和KLV3502),产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒,可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。
原核培养特性
pLV-EF1a-EGFP-2A载体为高拷贝质粒,带有氨苄抗性基因,可以在含有100 μg/ml氨苄抗生素的LB培养基中增殖。
宿主菌可以采用DH5α,JM109,TOP10等常见大肠杆菌菌种。
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