载体特性
类型：慢病毒基因过表达载体
基因启动子：EF1a promoter
荧光标签：ECFP
真核细胞筛选抗性：Puromycin
原核抗性：Ampicillin
 

 

pLV-EF1a-ECFP-N载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体。该载体的多克隆位点位于ECFP基因上游，在EF1a启动子驱动下表达目的基因和ECFP融合蛋白。EF1a启动子来自人类EEF1A基因，可在多数种类细胞中稳定表达，尤其是某些CMV启动子会发生沉默的细胞如干细胞等。PGK启动子驱动表达Puromycin抗性基因。利用本载体包装的慢病毒将表达Puromycin抗性基因，可以方便地使用Puromycin筛选出稳定过表达目的基因的细胞。同时表达带有ECFP荧光标签的目的基因，可以很容易的对病毒感染效率以及目的基因的表达和定位进行监测。
pLV-EF1a-ECFP-N载体包含了生产慢病毒所必须的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表达效率的原件。载体结构紧凑，在保证产生高滴度病毒的同时，载体对外源基因片段的容量达到3kb，多数哺乳动物基因都可以在pLV-EF1a-ECFP-N中成功表达。
 

 

使用说明 
pLV-EF1a-ECFP-N载体用于在包括原代培养细胞在内的各种哺乳动物细胞中稳定表达外源基因和Puromycin抗性基因。pLV-EF1a-ECFP-N载体与包装载体共转染HEK293T细胞后（包装体系货号KLV3501和KLV3502），产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒，可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。

ECFPZui大激发波长：439nm
ECFPZui大发射波长：476nm

原核培养特性 
pLV-EF1a-ECFP-N载体为高拷贝质粒，带有氨苄抗性基因，可以在含有100 μg/ml氨苄抗生素的LB培养基中增殖。

宿主菌可以采用DH5α，JM109，TOP10等常见大肠杆菌菌种。